Microscopía
El microscopio y las principales técnicas histológicas
La microscopía permite el estudio de las estructuras que no son posibles de ver con nuestra observación directa, es decir, están "por debajo de nuestra agudeza visual normal" (1). Para ello utiliza un instrumento denominado Microscopio.
Tipos y funcionamiento
¿Qué es y cuántos tipos de microscopio existen?
Del griego "micro=pequeño" y "scopeo=ver", es un instrumento que nos permite ver estructuras "pequeñas" o microscópicas.
Existen básicamente dos tipos de microscopios:
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Óptico
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Electrónico
¿Cómo es un microscopio óptico?
Un microscopio óptico se basa en dos sistemas que combinan un juego de lentes y el uso de luz visible para aumentar la imagen de una muestra:
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El sistema óptico
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El sistema mecánico
Sistema óptico
El foco emite rayos de luz que atraviesan un condensador acoplado a un diafragna para concentrar y regular los rayos de luz sobre la muestra.
Los rayos de luz llegan al objetivo (conjunto de lentes) y permiten aumentar la imagen observada.
Finalmente, el ocular, amplía la imagen proveniente del objetivo y es a través de él que se puede observar finalmente la muestra.
Sistema mecánico
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La base permite mantener el microscopio en posición estable.
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El brazo conecta la base con el sistema óptico.
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La platina, lugar donde se coloca la muestra, puede regular su posición mediante los tornillos macrométrico y micrométrico.
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El revólver sostiene a los objetivos, (3 o 4), y que puede girar para seleccionar el objetivo deseado.
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El tubo conecta los objetivos con el ocular.
Formación de la imágen
La luz del atraviesa la muestra y formar una imagen en el objetivo, misma que se amplía y proyecta al ocular (como un proyector).
La imagen proyectada se va a formar en el aire entre el objetivo y el ocular (imagen primaria o imagen aérea) y alcanza al ocular, que amplía la imagen primaria, (imagen secundaria), que es la que alcanza el observador con su retina.
Se denomina imagen virtual, porque se percibe como si se tuviese un plano que va más allá del objeto real que se observa.
Observación de tejidos vivos
Se puede observa células y tejidos en tejido fresco o "in vivo" por ejemplo al ver larvas, protozoarios, células de la mucosa bucal, vaginal, del epitelio bronquial o espermatozoides. Para esta observación, es necesario usar el microscopio de contraste de fase, que permite observar las células y tejidos sin colorear. También es importante el empleo de soluciones con una concentración fisiológica de sales que permite mantener las células vivas durante la observación. Cuando se desea observar las células vivas en cultivo, se debe usar un microscopio invertido equipado con contraste de fase, y una platina calefaccionada que mantenga la temperatura de la placa de cultivo (36 °C) a lo largo de la observación.
Observación de tejidos muertos
La preparación del tejido dependerá del tipo de microscopía: óptica o electrónica. En ambos casos el proceso incluye:
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Fijación
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Inclusión y corte
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Tinción
Existen además los métodos Histoquímicos
Microscopía Óptica
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Obtención del tejido o muestra
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Fijación
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Deshidratación
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Inclusión
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Corte
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Desparafinación e hidratación
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Coloración
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Deshidratación
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Montaje
Microscopía Electrónica
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Obtención de las muestras
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Fijación
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Inclusión
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Corte
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Contraste-coloración
Técnicas histológicas
Dependerán del tipo de observación:
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Observación directa de células y tejidos vivos
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Observación de material muerto o inanimado
En la zona intermedia se ubican las técnicas de aislamiento de los componentes de células vivas mediante métodos de centrifugación.
Preparación de tejidos
Problemas en la interpretación de cortes de tejido
Artefactos: Estructuras del preparado que no existen en el tejido vivo, pero que aparecen artificialmente durante el procedimiento de preparación:
Retracción: hendiduras u orificios vacíos
Precipitados de colorante: cristales coloreados por encima del corte
Plegamientos: pueden formarse en el momento de la sección o durante el posterior procesamiento de los delgados cortes
Imperfecciones de la cuchilla del micrótomo: líneas rectas que atraviesan las estructuras biológicas
Rotura del tejido durante la extracción: groseras variaciones del aspecto de las células
Fijación demasiado lenta o insuficiente: artefactos después de la degeneración post mórtem (autolisis)